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DTA负筛选基因实验:DTA(Diphtheria Toxin A)负筛选基因是一种常用的遗传工程工具,主要用于剔除未发生特定重组事件的细胞。这种技术依赖于白喉毒素A链(DTA),它能抑制蛋白质合成并导致细胞死亡。在基因打靶实验中,DTA通常被用来作为负筛选标记,以确保只有那些经历了正确同源重组的细胞才能存活下来。
药物诱导基因敲除实验(如他mo昔芬系统或四环素系统)是在靶基因两侧插入特定重组酶识别位点后,通过给药定时激活Cre-ER或Tet-On/Tet-Off等重组酶,实现特定器官、特定时间点的高效基因删除,兼顾全身敲除的che底性与条件性敲除的时空精度,是研究基因功能和药物靶点验证的利器。
条件性基因敲除实验借助Cre/loxP或Flp/FRT系统,只在特定细胞类型或发育阶段通过组织特异性启动子驱动重组酶切除被loxP/FRT环绕的目标基因,从而规避胚胎致死、实现精准时空敲除,是解析基因功能与疾病机制的核心遗传学工具。
RNA干扰实验(RNA interference, RNAi)是一种由双链RNA(dsRNA)介导的转录后基因沉默现象,通过特异性降解目标mRNA实现基因表达调控。
DNA片段的克隆需要合适的载体,载体或是质粒,或是噬菌体,或是病毒,通常大多经过人工改造。作为载体必须具备两条件:一是该载体在细胞内必须能自主复制,即必须具备复制原点;二是该载体必须具备适合的酶切位点,且这些酶切位点不在复制原点区域内。以上两条,保证了载体的可繁殖性和可利用性。为了便于获得阳隆克隆,载体上常有筛选标记,如对抗菌素的抗性,某些基因产物的显色反应等。
慢病毒(Lentivirus)载体是以HIV-1(人类免疫缺陷I型病毒)为基础发展起来的病毒载体。对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力,可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上,从而达到持久性表达。在体外实验及体内实验的研究中,慢病毒己经成为表达外源基因或外源shRNA的常用载体形式之一, 并且正在获得越来越广泛的应用。
生物信息学(Bioinformatics)是在生命科学的研究中,利用应用数学、信息学、统计学和计算机科学为工具对生物信息进行储存、检索和分析的科学。
通过非病毒方法将核酸引入真核细胞的过程定义为转染。使用各种化学,脂质或物理方法,该基因转移技术是在细胞背景下研究基因功能和蛋白质表达的有力工具。将外源物质导入细胞的方法主要包括脂质体转染(瞬时转染和稳定转染),电转或者病毒感染。病毒载体是进行真核细胞基因工程、真核基因转染的有力工具。